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網(wǎng)站首頁新聞資訊 ◇ 數(shù)字分光光度計(jì)使用方法步驟
數(shù)字分光光度計(jì)使用方法步驟
更新時(shí)間:2018-03-15 點(diǎn)擊次數(shù):2577次
   數(shù)字分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量。儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統(tǒng)組成。
  數(shù)字分光光度計(jì)原理
  數(shù)字分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長的光源,通過系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長的光源,光線透過測試的樣品后,部分光線被吸收,計(jì)算樣品的吸光值,從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
  單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時(shí),被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比,其關(guān)系為:A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc  式中:A 為吸光度;I。為入射的單色光強(qiáng)度;I 為透射的單色光強(qiáng)度;T 為物質(zhì)的透射率;k 為摩爾吸收系數(shù);L 為被分析物質(zhì)的光程,即比色皿的邊長;c為物質(zhì)的濃度;
  物質(zhì)對光的選擇性吸收波長,以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū),除某些物質(zhì)對光有吸收外,很多物質(zhì)本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測定時(shí)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r(shí)操作。
  數(shù)字分光光度計(jì)使用方法步驟
  1)預(yù)熱儀器。為使測定穩(wěn)定,將電源開關(guān)打開,使儀器預(yù)熱20min,為了防止光電管疲勞,不要連續(xù)光照。預(yù)熱儀器時(shí)和在不測定時(shí)應(yīng)將比色皿暗箱蓋打開,使光路切斷。
  2)選定波長。根據(jù)要求,轉(zhuǎn)動(dòng)波長調(diào)節(jié)器,使指針指示所需要的單色光波長。
  3)固定靈敏度檔。根據(jù)有色溶液對光的吸收情況,為使吸光度讀數(shù)為0.2-0.7,選擇合適的靈敏度。為此,旋動(dòng)靈敏度檔,使其固定于某一檔,在實(shí)驗(yàn)過程中不再變動(dòng)。一般測量固定在“1”檔。
  4)調(diào)節(jié)“0”點(diǎn)。輕輕旋動(dòng)調(diào)“0”電位器,使讀數(shù)表頭指針恰好位于透光度為“0”處(此時(shí),比色皿暗箱蓋是打開的,光路被切斷,光電管不受光照)。
  5)調(diào)節(jié)T=。將盛蒸餾水(或空白溶液或純?nèi)軇?的比色皿放入比色皿座架中的*格內(nèi),有色溶液放在其它格內(nèi),把比色皿暗箱蓋子輕輕蓋上,轉(zhuǎn)動(dòng)光量調(diào)節(jié)器,使透光度T=,即表頭指針恰好指在T=處。
  6)測定。輕輕拉動(dòng)比色皿座架拉桿,使有色溶液進(jìn)入光路,此時(shí)表頭指針?biāo)緸樵撚猩芤旱奈舛華。讀數(shù)后,打開比色皿暗箱蓋。
  7)關(guān)機(jī)。實(shí)驗(yàn)完畢,切斷電源,數(shù)字分光光度計(jì)將比色皿取出洗凈,并將比色皿座架及暗箱用軟紙擦凈。
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